ATCC細胞的冷凍保存方法：

　　傳統(tǒng)方法是冷存管置于4℃10分鐘→-20℃30分鐘→-80℃16-18小時（或隔夜）→液氮槽長期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

　　程序降溫則利用已設(shè)定程序的等速降溫機以-1~-3℃/分鐘之速度由室溫降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽長期儲存。適用于懸浮型細胞之保存。

　　那么ATCC細胞又如何解凍呢？

　　1.冷凍細胞之活化原則為快速解凍，以避免冰晶重新結(jié)晶而對細胞造成傷害，導致細胞之死亡。

　　2.細胞活化后，約需數(shù)日，或繼代一至二代，其細胞生長或特性表現(xiàn)才會恢復正常。

　　3.材料：37℃恒溫水槽、新鮮培養(yǎng)基、無菌吸管/離心管/培養(yǎng)瓶、液氮或干冰容器。

　　4.主要步驟：

　?、俨僮魅藛T應戴防護面罩及手套，防止冷凍管可能爆裂之傷害；

　?、谧砸旱蚋杀萜髦腥〕隼鋬龉?，檢查蓋子是否旋緊，由于熱脹冷縮過程，此時蓋子易松掉；

　?、蹖⑿迈r培養(yǎng)基置于37℃水槽中回溫，回溫后噴以70%酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內(nèi)；

　?、苋〕隼鋬龉?，立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，以70%酒精擦拭保存管外部，移入無菌操作臺內(nèi)；

　?、萑〕鼋鈨鲋毎麘腋∫海従徏尤胗信囵B(yǎng)基之培養(yǎng)容器內(nèi)（稀釋比例為1：10-1：15），混合均勻，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取0.1ml解凍細胞懸浮液作存活測試；

　?、藿鈨龊笫欠窳⒓慈コ鋬霰Ｗo劑（如DMSO），依細胞種類而異，一般而言，大都不需要立即去除冷凍保護劑。惟若要立即去除，則將解凍之細胞懸浮液加入含有5-10ml培養(yǎng)基之離心管內(nèi)，離心1000rpm，5分鐘，移去上清液，加入新鮮培養(yǎng)基，混合均勻，放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)；

　?、呷舨恍枇⒓慈コ鋬霰４鎰瑒t在解凍培養(yǎng)后隔日更換培養(yǎng)基。

>> 返回首頁